Bộ phim xoay quanh những cuộc nội chiến mà Hoàng hậu Insoo - mẹ của vua Sooyang phải đối mặt trong suốt cuộc đời mình. Lấy nhân vật Insoo làm trung tâm, “Nữ hoàng Insoo” tái hiện lại những cuộc chiến chốn thâm cung tàn khốc giữa ba người phụ nữ, mang đến cho khán giả những tập phim vô cùng kịch tính và hấp dẫn.

Insoo là một cô tiểu thư xinh đẹp với vẻ bề ngoài có phần yếu đuối và dịu dàng. Tuy nhiên, không ai biết rằng ẩn sâu trong con người cô lại là một người phụ nữ với lòng khao khát quyền lực vô cùng mạnh mẽ. Sau khi kết hôn với hoàng tử Do Woon, con thứ hai của vua Sejong, Insoo tự mình đối đầu với những cạm bẫy chốn cung đình, và không ngừng nuôi tham vọng giành lấy địa vị tối cao về tay mình.

Với Hoàng hậu Junghee – vợ của vua Sejong - ngay từ ban đầu, bà đã tỏ ra rất thận trọng với nàng dâu Insoo. Bà có thể nhìn thấy được tham vọng của con dâu nên luôn thật cẩn trọng đối phó với những toan tính ngầm của cô nhằm bảo vệ vị trí của bản thân.

Hoàng hậu Yoon – vợ vua Sooyang đồng thời là con dâu của Insoo - cũng là một người phụ nữ có ham muốn chiếm hữu vô cùng lớn, ngay từ khi còn là một đứa trẻ mới được đưa vào cung, cô đã luôn tâm niệm là phải giành được địa vị cao với nhiều quyền lực.